Herramientas inmunológicas y diagnósticas basadas en la proteína NS5 de flavivirus
Resumo
La emergencia y reemergencia de infecciones por flavivirus en las últimas décadas representa una amenaza creciente para la salud pública global. La co-circulación de flavivirus antigénicamente relacionados en la región de las Américas presenta un desafío significativo para el diagnóstico serológico, ya que la reactividad cruzada de los anticuerpos, especialmente contra la proteína de envoltura (E), limita la especificidad de los inmunoensayos convencionales. Para superar esta limitación, la proteína no estructural 5 (NS5) ha emergido como un antígeno prometedor. En este trabajo de tesis, se evaluó el potencial de la NS5 para el desarrollo de herramientas de diagnóstico específicas. Se produjo y purificó un panel de proteínas NS5 recombinantes de diversos flavivirus de importancia regional, las cuales demostraron ser funcionalmente activas y antigénicas. Estas proteínas se utilizaron para desarrollar un ensayo de ELISA indirecto para la detección de anticuerpos IgG y para generar sueros policlonales específicos, concebidos como herramientas inmunológicas para el estudio de la proteína NS5. Los sueros generados mostraron altos títulos. La validación del ensayo ELISA-NS5-SLEV con un panel de muestras clínicas exhibió una especificidad del 100% y una sensibilidad del 84.2%. Adicionalmente, los ensayos preliminares demostraron el potencial del sistema para discriminar entre infecciones por DENV y SLEV. En conjunto, estos resultados validan a la proteína NS5 como un antígeno valioso para el desarrollo de métodos de diagnóstico serológico más específicos, proporcionando una base sólida para la creación de inmunoensayos mejorados que contribuyan a una vigilancia epidemiológica más precisa.